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Melo e Castro / 2014

Moises Mallo

Moises Mallo

Moises Mallo

Melo e Castro 2014

PROJETO

Novos substratos celulares para terapias de regeneração espinal

INSTITUIÇÃO PROPONENTE

Instituto Gulbenkian de Ciência

RESUMO DO PROJETO

Uma componente chave das estratégias de regeneração é a seleção das células mais apropriadas para serem transplantadas no tecido lesionado com o objetivo final de recuperar as propriedades funcionais desse tecido. No caso de lesões medulares, têm sido transplantados vários tipos celulares que atingiram diferentes graus de sucesso. Isto indica que o rumo do processo de regeneração pode refletir o potencial das diferentes células dadoras, na promoção de linhagens celulares relevantes para a estrutura e função da medula espinal.

Nesta perspetiva, as células que naturalmente produzem a medula durante o desenvolvimento embrionário devem estar entre as mais apropriadas para serem células dadoras, uma vez que devem ter a capacidade para produzir todos os tipos celulares necessários para formar uma medula espinal funcional.
Esforços para isolar os progenitores espinais têm tido pouco sucesso, devido em grande parte à ausência de marcadores de superfície que permitam o seu isolamento. Para além disto, estas células mostraram ser também particularmente refratárias à cultura in vitro, o que pode ter também um impacto negativo no seu uso em abordagens de regeneração. O principal objetivo deste projeto é por isso identificar a identidade molecular destes progenitores, com origem em

ratinhos e desenvolver as condições que promovam a expansão eficiente dos mesmos, para que possam guiar a produção e expansão de células com características de progenitores espinais, a partir de células iPS ou outras células com potencial pluripotente equivalente. Nós planeamos ultrapassar os problemas que têm travado o isolamento e cultura dos progenitores espinais com o auxílio de ferramentas que desenvolvemos recentemente no nosso laboratório. Uma dessas ferramentas consiste num sistema que permite a seleção funcional dos progenitores relevantes que foram marcados previamente com um marcador fluorescente. Este sistema será usado para recuperar populações enriquecidas de progenitores espinais e obter as suas impressões digitais moleculares. A segunda ferramenta de que dispomos resultou de uma série de experiências que decorreram no laboratório e que permitiram a identificação de uma linha mutante de ratinhos que contém medulas espinais aumentadas como resultado de uma população expandida de progenitores. Interessantemente, experiências preliminares sugerem que os progenitores espinais de embriões desta linha mutante podem ser cultivados in vitro de forma eficiente. Nós pretendemos identificar o que confere aos progenitores desta linha a capacidade de produzir progenitores espinais e usar estas características para promover a sua formação de explantes de embriões normais e de células pluripotentes. Finalmente iremos procurar as condições de cultura que podem enriquecer estes progenitores na formação da espinal medula. Estas condições irão incluir a modificação genética dos progenitores usando a tecnologia CRISPR/Cas9, de forma a prevenir que estes progenitores tomem caminhos alternativos de diferenciação.

EQUIPA

> Ana Leonor Vidal Gomes Casaca
> Ana Cabral Couto Lopes Nóvoa
> Ana Rita Conceição Aires
> Irma Varela Lasheras